双缩脲试剂检测蛋白质原理是什么?

双缩脲反应是指:

具有两个或两个以上肽键的化合物在碱性条件下与铜的一价离子反应,生成红紫色的络合物的化学反应。

所有的蛋白质均有此显色反应,双缩脲试剂就是指能与具有两个以上肽键的化合物发生红紫色显色反应的试剂,它是氢氧化钠和硫酸铜两种溶液组成的。

在双缩脲反应的实验过程中,先在含蛋白质的溶液中加入等体积的氢氧化钠溶液,混合均匀后,再滴几滴硫酸铜溶液,即先后加入含蛋白质的溶液,混合液中就没有铜的二价离子,显色反应就不会发生。

双缩脲试剂检测蛋白质要加热吗?

双缩脲试剂检测蛋白质不需要加热,蛋白质可与双缩脲试剂产生紫色反应。

双缩脲试剂是一种用于鉴定蛋白质的分析化学试剂。它是一种碱性的含铜试液,呈蓝色,由0.1g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制而成。会遇到蛋白质显紫色。

双缩脲试剂本是用来检测双缩脲,由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应。当底物中含有肽键时(多肽),试液中的铜与多肽配位,络合物呈紫色。可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。

双缩脲试剂中真正起作用的是硫酸铜,而氢氧化钾仅仅是为了提供碱性环境,因此它可被其他碱,如氢氧化钠所代替。向试剂中加入碘化钾,会延长试剂的使用寿命。酒石酸钾钠的作用是保护反应生成的络离子不被析出变为沉淀,从而使试剂失效。

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